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1、p1：葡萄糖使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；EDTA是Ca²⁺和Mg²⁺等二价金属离子的螯合剂，其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性；可添加RNase A消化RNA。

2、p2：此步为碱处理。

3、其中NaOH主要是为了溶解细胞，释放DNA，因为在强碱性的情况下，细胞膜发生了从双层膜结构向微囊结构的变化。

4、SDS与NaOH联用，其目的是为了增强NaOH的强碱性，同时SDS作为阴离子表面活性剂破坏脂双层膜。

5、p3：溶液III的作用是沉淀蛋白和中和反应。

6、其中醋酸钾是为了使钾离子置换SDS中的钠离子而形成了PDS，因为十二烷基硫酸钠遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾 ，而PDS是不溶水的，同时一个SDS分子平均结合两个氨基酸，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了。

7、2M的醋酸是为了中和NaOH。

8、基因组DNA一旦发生断裂，只要是50-100 kb大小的片断，就没有办法再被 PDS共沉淀了，所以碱处理的时间要短，而且不得激烈振荡，不然最后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入，琼脂糖电泳可以观察到一条浓浓的总DNA条带。

9、75%酒精主要是为了清洗盐份和抑制Dnase；同时溶液III的强酸性也是为了使DNA更好地结合在硅酸纤维膜上。

10、扩展资料质粒具有自主复制能力，使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。

11、细菌质粒为DNA重组技术中常用的载体。

12、载体，把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进受体细胞中去进行增殖和表达的工具。

13、将某种目标基因片段重组到质粒中，构成重组基因或重组体。

14、然后将这种重组体经微生物学的转化技术，转入受体细胞（如大肠杆菌）中，使重组体中的目标基因在受体菌中得以繁殖或表达，从而改变寄主细胞原有的性状或产生新的物质。

15、参考资料来源：百度百科-质粒参考资料来源：百度百科-质粒抽提P1作用是悬菌，使菌体分散。

16、P2是强碱，作用是裂解菌体。

17、大提质粒和小提质粒的基本原理是一样的，都是通过一定的方法（如加碱裂解）使在细菌内大量扩增的质粒释放出来，经过去蛋白去RNA等一系列步骤纯化DNA，最终将DNA提取出来。

18、配方是：1 Mol/L Tris-Hcl（pH8.0） 25mL0.5Mol/L EDTA-NaOH(pH 8.0) 20mL20%葡萄糖 45mLH2O 910mLRnase（RNA酶，zhi100U） 10-20uL扩展资料：用于大肠杆菌中质粒DNA的小量提取，它结合了优化的碱裂解法，以及方便快捷的硅膜离心技术，具有高效，快捷的特点，能在30min内完成全部操作。

19、利用试剂盒能从1-5mL过夜培养的大肠杆菌菌液中纯化得到10-40μg高质量的质粒DNA（OD260/OD280=1.7-1.9），此质粒DNA可直接用于DNA序列分析，各种酶促反应，PCR以及部分细胞系的转染等。

20、其中用到三种溶液以及硅酸纤维膜（超滤柱）。

21、 溶液Ⅰ：50 mM葡萄糖 / 25 mMTris-HCl/ 10 mMEDTA，pH 8.0；溶液Ⅱ：0.2 N NaOH / 1%SDS； 溶液Ⅲ：3 M 醋酸钾/ 2 M 醋酸/75%酒精。

22、参考资料来源：百度百科-质粒抽提。

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